湿热法是在高压灭菌器中使用高压蒸汽或高温水进行灭菌的方法。
因微生物在湿热的环境中，一些重要的蛋白发生变性和凝固，会使微生物死亡，从而达到灭菌的目的。
较之干热灭菌，在湿热的条件下，微生物可在相对较低的温度下被杀死。高压灭菌器的常规操作温度是121℃，时间是10～20min；也可选择达到相同杀灭效果的115℃，一般时间45min。
总时间包括：
1、热力穿透时间，即从消毒柜内达到灭菌温度至消毒物品中心部位亦达到灭菌温度所需时间。时间的长短取决于消毒物品的性质、包装的大小,放置位置和高压锅内空气排空程度和灭菌器的种类。
2、消毒维持时间，即杀灭微生物所需的时间，一般用杀灭脂肪嗜热杆菌芽胞所需时间来表示。在115℃时需30分钟，121℃时需12分钟，132℃时需2分钟。
3、 *时间，一般为维持时间的一半，其长短视消毒物品而定。对易导热的金属器材的灭菌，不需要*时间。
下表提供的数据可供实际工作中参考。
注：
包装体积 < 30×30×30cm3
对于粘性液体，如琼脂培养基等，应延长时间5～10分钟。
一般下排气式高压灭菌器所需时间为：115℃需要30分钟、121℃需要15分钟、126℃需要10分钟115℃常用于制药工业上的灭菌。在微生物实验室内，有些含糖培养基亦用115℃30分钟灭菌，因为在更高温度下糖会分解。121℃～126℃常用于医疗卫生和防疫工作中的灭菌。
以上所述知识灭菌时间的概数，1次灭菌中具体使用多少时间，需要根据物品的种类、包装的大小、安放情况和灭菌器的性能来确定。
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